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可视化细胞色素b5蛋白的显色核心片段解析 认领
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作者 展恩玲 盛成旺 +2 位作者 陈煜明 唐涛 赵春青 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期97-102,共6页
[目的]本文旨在明确含Cyt-b 5类血红素/类固醇结合结构域(Cyt-b 5D)显色片段的最佳长度及其与原核表达载体的普适性,并筛出有效的可视化标签,以期提高载体构建的效率和便捷性。[方法]分析二化螟Cyt-b 5蛋白结构域,将其划分成含Cyt-b 5D... [目的]本文旨在明确含Cyt-b 5类血红素/类固醇结合结构域(Cyt-b 5D)显色片段的最佳长度及其与原核表达载体的普适性,并筛出有效的可视化标签,以期提高载体构建的效率和便捷性。[方法]分析二化螟Cyt-b 5蛋白结构域,将其划分成含Cyt-b 5D的不同长度片段(OA、OB、OC等),并分别与3种原核表达载体pET-28a(+)、pET-41a(+)和pET-30a(+)进行连接和异源表达;将筛选的显色片段与二化螟RDL 1基因融合表达,比较不同表达时间菌液的显色反应和吸光值;用亲和层析法纯化显色片段表达以及与RDL 1表达的融合蛋白,然后进行Western blot检测。[结果]OA片段是最佳的显色片段,在3种原核表达载体中均可表达出红色的蛋白,且与RDL 1融合表达时显色稳定,表明其具有普适性。在420 nm波长下的特征吸收峰可用于实时监测显色菌液的生长状态,而层析柱中的红色变化可用于判断蛋白纯化过程。此外,利用Western blot可检测到目的蛋白,表明显色片段的存在并未干扰目的蛋白的准确鉴定。[结论]Cyt-b 5显色片段(OA)可作为原核表达系统的可视化标签,为蛋白表达和纯化等试验操作提供指示标记,从而提高其操作的便捷性和时效性。 展开更多
关键词 细胞色素b 5 载体构建 原核表达 Western blot 可视化标签
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白背飞虱VAMP7和Vti1a蛋白的原核表达、抗体制备及应用 认领
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作者 张潇婉 张璐 +2 位作者 刘文文 李莉 王锡锋 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期55-60,共6页
白背飞虱Sogatella furcifera的囊泡相关膜蛋白7(VAMP7)和囊泡转运蛋白(Vti1a)隶属于SNARE(soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor)家族,该家族蛋白主要参与生物体中关键的膜转运过程。前期研究发现... 白背飞虱Sogatella furcifera的囊泡相关膜蛋白7(VAMP7)和囊泡转运蛋白(Vti1a)隶属于SNARE(soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor)家族,该家族蛋白主要参与生物体中关键的膜转运过程。前期研究发现这两种蛋白分别与南方水稻黑条矮缩病毒Southern rice black-streaked dwarf virus(SRBSDV)的主要外层衣壳蛋白P10存在显著互作,推测可能协助病毒粒体在介体白背飞虱内的转运和扩散。为了进一步利用血清学技术研究VAMP7和Vti1a在传毒过程中的功能,本研究克隆了白背飞虱编码这两种蛋白的基因,成功构建了VAMP7和Vti1a基因的原核表达载体,并将载体分别转入大肠杆菌中进行诱导表达,得到了相应的原核表达蛋白。在蛋白纯化后,将纯化蛋白注射于新西兰大白兔体内进行免疫,分别制备得到VAMP7和Vti1a的抗体。两种抗体经Western blot检测发现,均可分别与白背飞虱体内的VAMP7和Vti1a特异性结合。利用制备的抗体对白背飞虱的肠道进行免疫标记,激光共聚焦显微镜观察发现所制备抗体能够在白背飞虱中肠上皮细胞的胞质中特异性标记到VAMP7和Vti1a,表明制备的抗体能够成功用于这两种蛋白的体内外检测,为阐明这两种蛋白参与传播SRBSDV的机制研究奠定了基础。 展开更多
关键词 白背飞虱 囊泡相关膜蛋白7 囊泡转运蛋白 原核表达 Western blot 免疫荧光标记
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结直肠腺癌中TKT的表达及临床意义 认领
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作者 张伟 高婉婉 +3 位作者 宋红 张伟璇 李佳嘉 张帆 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期146-150,156,共6页
目的探讨结直肠腺癌中转酮醇酶(transketolase, TKT)的表达及与临床病理特征的关系。方法通过Oncomine和GEO数据库分析TKT基因在结直肠腺癌和癌旁组织中的表达。收集配对结直肠腺癌及癌旁正常肠黏膜组织,分别采用qRT-PCR、Western blot... 目的探讨结直肠腺癌中转酮醇酶(transketolase, TKT)的表达及与临床病理特征的关系。方法通过Oncomine和GEO数据库分析TKT基因在结直肠腺癌和癌旁组织中的表达。收集配对结直肠腺癌及癌旁正常肠黏膜组织,分别采用qRT-PCR、Western blot法检测TKT mRNA和蛋白表达,运用免疫组化法检测TKT蛋白表达,并分析其与临床病理特征的相关性。结果 qRT-PCR结果显示:与癌旁组织相比,27例结直肠腺癌组织中TKT mRNA表达显著升高(P<0.001);Western blot结果显示:8例结直肠腺癌组织中TKT蛋白表达高于癌旁组织,在常见结直肠癌细胞株中TKT蛋白表达高于FHC细胞株;两种检测与数据库样本分析一致。免疫组化检测结果显示:92例结直肠腺癌组织中TKT高表达率显著高于癌旁组织(P<0.001),TKT高表达与肿瘤直径(P=0.003)、脉管侵犯(P=0.021)、淋巴结转移(P=0.005)及T分期(P=0.007)相关。结论 TKT在结直肠腺癌中呈高表达,与肿瘤侵袭转移临床病理特征密切相关,其可能参与结直肠腺癌的发生、发展,TKT有望成为结直肠癌预后标志物或潜在的治疗靶点。 展开更多
关键词 结直肠肿瘤 TKT QRT-PCR Western blot 免疫组织化学
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大豆(Glycine max(L.)Merr.)致敏蛋白Gly m Bd 30K检测方法及低致敏优异种质鉴定 认领
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作者 周明明 张明俊 +1 位作者 王俊 邱丽娟 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期149-156,共8页
Gly m Bd 30K蛋白是大豆中主要的免疫显性过敏原之一,会引起人和牲畜腹泻和肠道炎症等过敏反应。因此,发掘低Gly m Bd 30K蛋白含量优异种质对于培育优质大豆品种具有重要意义。为了获得致敏蛋白Gly m Bd 30K低含量的优异种质,根据Gly m ... Gly m Bd 30K蛋白是大豆中主要的免疫显性过敏原之一,会引起人和牲畜腹泻和肠道炎症等过敏反应。因此,发掘低Gly m Bd 30K蛋白含量优异种质对于培育优质大豆品种具有重要意义。为了获得致敏蛋白Gly m Bd 30K低含量的优异种质,根据Gly m Bd 30K蛋白的190-379aa多肽序列制备多克隆抗体;对来源于山西省的29份种质,利用Western blot技术对其Gly m Bd 30K蛋白含量进行检测;并扩增和分析Gly m Bd 30K基因序列;利用荧光定量PCR技术对筛选出的低Gly m Bd 30K含量种质进行表达分析。结果表明:从参试种质中鉴定出2份Gly m Bd 30K蛋白含量低的种质,Gly m Bd 30K蛋白低含量种质的鉴定效率为6.9%,分别是来自太原市的大豆种质134(ZDD02046)和大青豆(ZDD02174),其Gly m Bd 30K基因序列与Willams82相比,在启动子上都有TA重复序列变异,134(ZDD02046)有8次TA重复,大青豆(ZDD02174)有42次TA重复,表达分析结果显示,134(ZDD02046)的转录水平显著低于大青豆(ZDD02174),推测启动子上TA多态性可能影响了其转录水平。本研究建立Gly m Bd 30K蛋白含量测定的方法,鉴定出2份低蛋白含量的优异种质,为今后选育优质蛋白组合的大豆新品种提供了技术和材料支撑。 展开更多
关键词 大豆 过敏原 Gly m Bd 30K 种质筛选 Western blot
补阳还五汤对自噬相关蛋白LAMP2的影响 认领
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作者 陈云欢 吴旋 +1 位作者 林幸清 汪欣 《中国卫生标准管理》 2021年第1期119-121,共3页
目的研究补阳还五汤对脑缺血后大鼠LAMP2蛋白表达的影响。方法2019年7月16日—2019年7月30日用改良线栓法制备大鼠中动脉栓塞模型,将50只大鼠随机分成5组,以补阳还五汤不同浓度进行灌胃治疗,每天灌胃1次,造模前灌胃7天,造模后继续灌胃7... 目的研究补阳还五汤对脑缺血后大鼠LAMP2蛋白表达的影响。方法2019年7月16日—2019年7月30日用改良线栓法制备大鼠中动脉栓塞模型,将50只大鼠随机分成5组,以补阳还五汤不同浓度进行灌胃治疗,每天灌胃1次,造模前灌胃7天,造模后继续灌胃7天。取造模后大鼠脑细胞用Western blot法进行LAMP2蛋白表达测定。探讨不同浓度补阳还五汤对LAMP2蛋白表达的影响。结果假手术组LAMP2蛋白表达水平明显高于模型组、常规、2倍及10倍剂量组,差异有统计学意义(P<0.01)。模型组LAMP2蛋白表达水平明显低于假手术组、2倍及10倍剂量组(P<0.01)。假手术组LAMP2表达水平最高,模型组最低,模型组与假手术组、2倍剂量组、10倍剂量组比较,差异有统计学意义(P<0.01),与常规剂量组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论补阳还五汤常规剂量治疗基本无效,10倍剂量组对脑缺血后大鼠的治疗效果确切有效。补阳还五汤可能通过上调LAMP2蛋白的表达使CMA活性上调进而发挥神经保护作用。 展开更多
关键词 补阳还五汤 CMA LAMP2 Western blot 脑缺血 神经修复
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IDH1 R132H突变对不同级别胶质瘤的影响及相关因素分析 认领
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作者 杜宁 王新军 +1 位作者 杨卓 曾凡涛 《中国实用神经疾病杂志》 2021年第6期468-474,共7页
目的检测人脑不同级别胶质瘤组织中IDH1 R132H突变及胶质瘤细胞系IDH1表达情况,探讨IDH1 R132H突变对不同级别胶质瘤的影响。方法采用q-PCR法检测U87、U251、LN-229、HS683、U118等胶质瘤细胞系中IDH1表达情况,回顾性收集70例经手术切... 目的检测人脑不同级别胶质瘤组织中IDH1 R132H突变及胶质瘤细胞系IDH1表达情况,探讨IDH1 R132H突变对不同级别胶质瘤的影响。方法采用q-PCR法检测U87、U251、LN-229、HS683、U118等胶质瘤细胞系中IDH1表达情况,回顾性收集70例经手术切除、病理确诊的胶质瘤组织标本(实验组)及同期因脑外伤行颅内减压术留取的脑组织标本20例(对照组),采用免疫组化法、Western blot法检测IDH1 R132H突变情况,所得数据采用SNK法或K-W检验,分类变量采用χ2检验,生存分析比较预后情况。结果IDH1在U87、HS683中相对表达较高,在U251、U118、LN-229中相对低表达;70例人脑胶质瘤组织标本中36例(51.4%)突变,突变主要发生在Ⅱ(51.7%)、Ⅲ(79.2%)级胶质瘤及星形胶质细胞瘤中(80.0%),差异有统计学意义(P<0.05);胶质瘤组织IDH1 R132H突变与患者年龄、癫痫发作、病理级别、Ki-67表达有关(P<0.05);Ⅱ、Ⅲ胶质瘤患者中IDH1 R132H的预后较好(P<0.05),Ⅳ级胶质瘤患者中IDH1 R132H与预后无明显相关性(P=0.72)。结论IDH1在U87、HS683细胞系中相对高表达,为胶质瘤发生机制的研究提供了较好的细胞模型。IDH1 R132H突变多发生在Ⅱ、Ⅲ级星形胶质细胞瘤患者中,且突变与患者年龄、癫痫发作、病理级别、Ki-67表达有关;IDH1 R132H突变的Ⅱ、Ⅲ级胶质瘤患者预后好于未突变的患者。 展开更多
关键词 胶质瘤 IDH1 R132H突变 免疫组化 Western blot Q-PCR
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文章速递siRNA抑制人卵巢癌SKOV-3细胞MDM2的表达及细胞增殖的研究 认领
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作者 王莹 贾志勇 赵燕颖 《中国实验诊断学》 北大核心 2021年第3期421-425,共5页
目的研究siRNA对人卵巢癌细胞SKOV-3细胞MDM2基因表达的抑制作用及对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法体外合成2对针对MDM2基因的siRNA,经脂质体转染导入SKOV-3细胞;转染siRNA MDM2(简称si-MDM2)转染阴性对照质粒到SKOV-3,并设只加转染... 目的研究siRNA对人卵巢癌细胞SKOV-3细胞MDM2基因表达的抑制作用及对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法体外合成2对针对MDM2基因的siRNA,经脂质体转染导入SKOV-3细胞;转染siRNA MDM2(简称si-MDM2)转染阴性对照质粒到SKOV-3,并设只加转染试剂作空白对照组,采用MTT法检测si-MDM2对细胞增殖的抑制作用。流式细胞仪检测细胞凋亡,并用Real-time PCR和Western blot分别从mRNA水平和蛋白水平检测si-MDM2对MDM2的抑制作用。结果 MTT结果表明转染siRNA MDM2后细胞生长受到抑制,与对照组比差异具有显著性(P<0.05);同时细胞发生凋亡和细胞周期阻滞,转染siRNA MDM2-1,2的凋亡率分别为47.8%和39.2%,转染阴性对照质粒和对照组未检测出明显的增殖抑制和凋亡改变。转染siRNA MDM2的细胞的MDM2基因表达分别下调到对照组的48.41%和46.51%;转染阴性对照质粒的MDM2基因没有明显改变。转染siRNA MDM2的细胞的MDM2蛋白表达水平同样显著低于对照组细胞(P<0.05)。结论 siRNA MDM2可以有效抑制SKOV-3细胞株中MDM2的表达,并抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 siRNA 卵巢癌细胞 MDM2 Western blot
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胃癌中异位病毒整合位点-1的表达及临床意义 认领
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作者 黄燕美 秦攀 +2 位作者 张凤 王海燕 陈淑勤 《癌症进展》 2021年第1期31-34,95,共5页
目的探讨异位病毒整合位点-1(EVI-1)在胃癌中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学法检测胃癌组织和癌旁组织中EVI-1蛋白的表达情况;采用蛋白质印迹法(Western blot)和实时荧光定量逆转录聚合酶链反应,分别检测人胃癌细胞株AGS、NCI-... 目的探讨异位病毒整合位点-1(EVI-1)在胃癌中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学法检测胃癌组织和癌旁组织中EVI-1蛋白的表达情况;采用蛋白质印迹法(Western blot)和实时荧光定量逆转录聚合酶链反应,分别检测人胃癌细胞株AGS、NCI-N87、MGC-803、HGC27和永生化正常胃黏膜细胞株GES-1中EVI-1的3个剪切变异体蛋白(MDS1/EVI-1、EVI-1、EVI-1△324)和EVI-1 mRNA(除MGC-803)的表达水平。结果胃癌组织中EVI-1蛋白的阳性表达率为76.7%(46/60),明显高于癌旁正常胃组织的41.7%(25/60),差异有统计学意义(P﹤0.01)。胃癌细胞中MDS1/EVI-1和EVI-1蛋白相对表达量均高于正常胃黏膜上皮细胞,差异均有统计学意义(P﹤0.05);MGC-803、AGS胃癌细胞中EVI-1△324蛋白相对表达量也高于正常胃黏膜上皮细胞,但差异无统计学意义(P﹥0.05)。HGC27、NCI-N87、AGS细胞株中EVI-1 mRNA相对表达量均高于GES-1细胞株,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论胃癌中EVI-1蛋白(除EVI-1△324亚型)和EVI-1 mRNA的表达均较癌旁正常胃黏膜组织高。EVI-1基因可能是潜在的胃癌原癌基因,尚有待进一步深入研究。 展开更多
关键词 异位病毒整合位点-1 胃癌 免疫组织化学 蛋白质印迹法 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应
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心室辅助装置引发血管性血友病因子损伤的检测方法研究 认领
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作者 葛婉宁 钟敏 张柳笛 《北京生物医学工程》 2021年第2期160-166,共7页
目的由于血液成分血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)的机械损伤现象发现和研究较晚,至今仍然定义模糊且缺乏相关的评价标准,非常不利于心室辅助装置(ventricular assist device,VAD)的创新设计与发展。本文通过研究分析,提... 目的由于血液成分血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)的机械损伤现象发现和研究较晚,至今仍然定义模糊且缺乏相关的评价标准,非常不利于心室辅助装置(ventricular assist device,VAD)的创新设计与发展。本文通过研究分析,提出检测vWF受高剪切应力损伤的实验方法。方法人血作为基础血样,离心式血泵BPX-80剪切前后的猪血作为测试血样,通过免疫印迹法,将电泳分离的vWF转移到膜上,然后用特异性抗体检测膜上vWF多聚体的分子量分布情况,根据vWF分子量的灰度值比值,定量分析vWF多聚体的机械损伤,整个实验过程包括制胶、电泳、转印、免疫反应和显色5部分。结果得到条带清晰完整且容易区分的vWF分子量分布图。其中健康人血vWF高分子量、中分子量、低分子量区域的灰度值比值与文献中健康人血vWF的实际比值相一致。BPX-80血泵剪切猪血中高分子量vWF与未经剪切的猪血高分子量vWF灰度值的比值随时间呈下降趋势,表明BPX-80血泵剪切对猪血中vWF的降解情况。结论成功设计并建立了vWF多聚体分析实验方法,为此后制定vWF机械损伤的标准化体外评价方案提供重要参考。 展开更多
关键词 心室辅助装置 血管性血友病因子 免疫印迹法 血液损伤 剪切力
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人根尖牙乳头干细胞条件培养基体外诱导成牙分化的研究 认领
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作者 严崎方 谢翠柳 鄢国伟 《西南军医》 2021年第1期16-19,共4页
目的探讨人根尖牙乳头干细胞(conditional medium of stem cells from apical papilla,SCAP-CM)条件培养基诱导牙髓细胞成牙分化的作用。方法从人新鲜拔除的离体牙中,分离培养根尖牙乳头干细胞,收集其在常氧和低氧环境下培养的条件培养... 目的探讨人根尖牙乳头干细胞(conditional medium of stem cells from apical papilla,SCAP-CM)条件培养基诱导牙髓细胞成牙分化的作用。方法从人新鲜拔除的离体牙中,分离培养根尖牙乳头干细胞,收集其在常氧和低氧环境下培养的条件培养基[SCAP-CM(N)和SCAP-CM(H)]。用浓缩后的SCAP-CM(N)、SCAPCM(H)处理牙髓细胞,检测牙髓细胞的碱性磷酸酶活性,以qRT-PCR检测成牙相关基因Runx2、ALP、DSPP、OCN及DMP-1的表达,以WesternBlot检测牙本质涎蛋白的表达。结果在加入成骨诱导培养基的前提下,7天后SCAP-CM(H)组的碱性磷酸酶活性明显提高,SCAP-CM(N)组其次,而空白对照组的碱性磷酸酶活性最低。在基因水平上,相比空白对照组,SCAP-CM(N)和SCAP-CM(H)组的成牙相关基因Runx2、ALP、DSPP在mRNA水平上的表达增加。在蛋白水平上,SCAP-CM(H)和SCAP-CM(N)组DSP表达较其他组有所增加。结论SCAP-CM在体外具有一定的诱导成牙本质的能力,具有协同促进矿化的能力,在再生性牙髓治疗中具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 人根尖牙乳头干细胞 牙髓细胞 蛋白印迹 成牙分化
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上海市嘉定区HIV抗体不确定人群流行病学调查及随访研究 认领
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作者 王嘉行 殷方兰 +1 位作者 张永 钟培松 《上海预防医学》 CAS 2021年第2期124-127,共4页
【目的】了解HIV抗体检测产生不确定结果的检出率及人群分布情况,并通过随访复检探讨蛋白印迹试验(WB)带型与HIV感染的关系。【方法】对2013—2017年上海市嘉定区疾病预防控制中心HIV抗体确证检测为不确定结果的样品来源、蛋白印迹试验... 【目的】了解HIV抗体检测产生不确定结果的检出率及人群分布情况,并通过随访复检探讨蛋白印迹试验(WB)带型与HIV感染的关系。【方法】对2013—2017年上海市嘉定区疾病预防控制中心HIV抗体确证检测为不确定结果的样品来源、蛋白印迹试验带型模式的分布及随访结果进行分析。【结果】698份待复测样本经WB试验报告为不确定结果者为151份,占21.63%。对其中100份标本进行随访,随访到50人,随访率50.00%。其中随访结果仍为HIV抗体不确定者28例,占56.00%,随访结果转为HIV抗体确认阴性和HIV抗体确认阳性者都是11例,占22.00%。151份不确定结果中共检测出18种带型,p24、gp160、和gp160p24是最为常见的3种带型,占79.47%。其中带型p24的样本随访结果为HIV抗体不确定者比例最高,达67.86%;带型gp160的样本随访结果为HIV抗体阴性者比例最高,达40.00%;带型gp160gp120p24、gp160p24p17和gp160gp120p66p51的随访结果均转为HIV抗体阳性。【结论】不同人群的HIV抗体不确定检出率存在差异,不同的WB带型阳转率也不尽相同,应加强特殊人群及特定WB带型样本的随访,以期尽早发现HIV感染的病例。 展开更多
关键词 HIV抗体 免疫印迹试验 不确定结果
蛋白质免疫印迹快速测定猪肺炎支原体抗原含量 认领
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作者 车巧林 胡芳 +2 位作者 沈晓红 董彦鹏 靳蒙蒙 《现代畜牧兽医》 2021年第1期14-18,共5页
为建立快速测定猪肺炎支原体抗原含量的方法,试验应用P46单抗建立不同CCU含量的猪肺炎支原体抗原蛋白免疫印迹图谱,测定不同批次的猪肺炎支原体抗原CCU含量,并与Western blot(WB)测定的CCU进行比较。结果显示:曝光5 s,107 CCU/mL含量以... 为建立快速测定猪肺炎支原体抗原含量的方法,试验应用P46单抗建立不同CCU含量的猪肺炎支原体抗原蛋白免疫印迹图谱,测定不同批次的猪肺炎支原体抗原CCU含量,并与Western blot(WB)测定的CCU进行比较。结果显示:曝光5 s,107 CCU/mL含量以上的猪肺炎支原体抗原在46 kDa处有条带,且条带粗细、明暗程度随着CCU含量的增高而增强;中试生产的7批抗原中,有3批抗原CCU和WB 2种方法测定的含量相同,两批抗原测定的含量基本相同;两批抗原测定的含量有差异,但差值在1.5~5.0倍之间。结果表明,WB可用于猪肺炎支原体抗原含量的快速测定。 展开更多
关键词 蛋白质免疫印迹 快速测定 猪肺炎支原体 抗原含量
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布莱凯特黑牛CB1基因克隆测序及表达分析 认领
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作者 刘贤勋 刘瑞莉 +4 位作者 吴磊 柏学进 于堃 肖超柱 董雅娟 《畜牧与兽医》 北大核心 2021年第3期7-12,共6页
本试验旨在研究布莱凯特黑牛CB1基因CDS区序列和表达情况,探讨CB1基因与脂肪沉积的关系。运用RT-PCR技术克隆CB1基因CDS区序列,并进行生物学分析;运用qRT-PCR技术检测不同组织的mRNA相对表达量;以及运用免疫组化技术对蛋白进行定位分析... 本试验旨在研究布莱凯特黑牛CB1基因CDS区序列和表达情况,探讨CB1基因与脂肪沉积的关系。运用RT-PCR技术克隆CB1基因CDS区序列,并进行生物学分析;运用qRT-PCR技术检测不同组织的mRNA相对表达量;以及运用免疫组化技术对蛋白进行定位分析,运用Western blot技术检测CB1蛋白在不同组织的表达量。结果显示,克隆获得的布莱凯特黑牛CB1基因CDS为1495 bp,编码477个氨基酸。进化树显示布莱凯特黑牛CB1基因与牛、山羊、绵羊同源性最高(>98%)。qRT-PCR结果显示CB1基因在不同组织均有表达,在脂肪组织中相对表达量最高;免疫组化显示CB1基因主要在脂肪细胞膜上表达;Western blot结果显示CB1蛋白在脂肪组织和肌肉组织均有表达,在脂肪组织表达量显著高于肌肉组织。综上推测,CB1基因参与脂质代谢相关调节过程,为肉牛肉质性状的分子选育提供参考。 展开更多
关键词 CB1基因 布莱凯特黑牛 生物信息学 荧光定量PCR 免疫组化 免疫印迹
大黄鱼小清蛋白提取工艺优化及免疫印迹分析 认领
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作者 吕春霞 杨留明 +2 位作者 陈世达 张慧恩 杨华 《食品与机械》 北大核心 2021年第3期150-156,179,共8页
通过测定小清蛋白得率,筛选出一种针对大黄鱼小清蛋白的提取液,并优化其提取工艺。结果表明:当提取时间为42 h,提取液浓度为72 mmol/L、提取液pH为8.0、料液比(m大黄鱼∶V提取液)为1∶180(g/mL)、提取温度为50℃时,小清蛋白得率为0.1742... 通过测定小清蛋白得率,筛选出一种针对大黄鱼小清蛋白的提取液,并优化其提取工艺。结果表明:当提取时间为42 h,提取液浓度为72 mmol/L、提取液pH为8.0、料液比(m大黄鱼∶V提取液)为1∶180(g/mL)、提取温度为50℃时,小清蛋白得率为0.1742%。通过阴离子凝胶柱层析进行分离纯化,采用免疫印迹分析确定小清蛋白分子量为12 kDa。 展开更多
关键词 大黄鱼 小清蛋白 分离纯化 免疫印迹
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文章速递固定化金属离子亲和发光二氧化硅纳米粒子的制备及其用于磷酸化蛋白免疫印迹标记 认领
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作者 毛雨晓 郑蒙蒙 +2 位作者 刘桂真 安保礼 康经武 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期384-390,共7页
发展了一种能够识别磷酸化蛋白的固定化金属离子亲和发光二氧化硅纳米粒子用于免疫印迹(Western Blot)磷酸化蛋白的标记。首先通过反相微乳液Stöber方法合成了掺杂异硫氰酸荧光素硅烷化衍生物的发光二氧化硅(FITC@SiO2)球形纳... 发展了一种能够识别磷酸化蛋白的固定化金属离子亲和发光二氧化硅纳米粒子用于免疫印迹(Western Blot)磷酸化蛋白的标记。首先通过反相微乳液Stöber方法合成了掺杂异硫氰酸荧光素硅烷化衍生物的发光二氧化硅(FITC@SiO2)球形纳米粒子,粒子平均粒径为60 nm。然后通过共聚反应在FITC@SiO2纳米粒子表面生成一层聚合物用于保护纳米粒子,并引入N,N-(双羧甲基)-L-赖氨酸功能基团用于螯合金属离子,从而实现固定化金属离子亲和作用。以α-酪蛋白作为实验模型,用高效液相色谱-质谱研究了螯合不同金属离子的发光纳米粒子对磷酸化蛋白的识别作用。结果表明,螯合了Ti4+金属离子的发光二氧化硅FITC@SiO2纳米粒子对α-酪蛋白酶解液中的磷酸化肽段的富集作用最强。利用这种发光二氧化硅FITC@SiO2纳米粒子对磷酸化肽段的特异性识别性能,可用于Western Blot实验中标记磷酸化蛋白的条带。结果显示,α-酪蛋白的电泳条带可以被亲和发光二氧化硅FITC@SiO2纳米粒子标记,而作为对照的牛血清白蛋白则没有被标记。 展开更多
关键词 免疫印迹 固定化金属离子亲和 发光二氧化硅纳米粒子 磷酸化蛋白标记
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文章速递820份蛋白印迹试验HIV-1抗体阳性结果分析 认领
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作者 唐宇 周良君 +1 位作者 杨红 李川 《中国艾滋病性病》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期268-270,共3页
目的通过研究分析绵阳市1型艾滋病病毒(HIV-1)受试者条带检出情况,提高实验室条带判读能力。方法对2019年绵阳辖区820份蛋白印迹试验HIV-1抗体检测阳性结果使用描述性分析、卡方检验、Fisher确切概率法和Kappa进行分析。结果阳性结果中... 目的通过研究分析绵阳市1型艾滋病病毒(HIV-1)受试者条带检出情况,提高实验室条带判读能力。方法对2019年绵阳辖区820份蛋白印迹试验HIV-1抗体检测阳性结果使用描述性分析、卡方检验、Fisher确切概率法和Kappa进行分析。结果阳性结果中出现全条带的有87.3%(716/820);p51和p66的条带检出情况一致性好(Kappa=0.827,P<0.001);≥56岁人群中,各条带间检出一致率大多高于≤55岁人群;820份样本中,来自男性613份,女性207份,不同性别中同一带型的检出率差异无统计学意义;感染者最小2岁,最大92岁,中位数53岁,56~74岁组中阳性人数最多,占34.5%(283/820);p17在不同年龄组间的检出率差异有统计学意义;来自医院的阳性人数最多,不同送检单位的gp41检出率、gp120检出率差异有统计学意义。结论绵阳地区HIV-1抗体阳性者在蛋白印迹试验中大多出现全条带结果;p51和p66检出一致性好;≥56岁和≤55岁人群免疫状况可能存在很大的区别,需要进一步分析原因。 展开更多
关键词 确证阳性 蛋白印迹试验 艾滋病病毒 带型
文章速递梅毒螺旋体IgM抗体检测在梅毒诊断中的意义 认领
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作者 刘意 娄金丽 +2 位作者 李宇 冯霞 魏虹娟 《中国艾滋病性病》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期292-294,共3页
目的探讨检测血清梅毒螺旋体IgM抗体在梅毒诊断中的临床意义。方法北京佑安医院性病门诊就诊者中已确诊为不同临床分期梅毒患者207例,治疗前采用免疫印迹法(TP-IgM-WB)检测血清中的IgM抗体同时进行快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)。患... 目的探讨检测血清梅毒螺旋体IgM抗体在梅毒诊断中的临床意义。方法北京佑安医院性病门诊就诊者中已确诊为不同临床分期梅毒患者207例,治疗前采用免疫印迹法(TP-IgM-WB)检测血清中的IgM抗体同时进行快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)。患者规范治疗后,每3个月复查1次,1年后每半年复查1次,随访两年。首次RPR检测阴性时,再次进行梅毒螺旋体IgM抗体检测。结果 207例确诊梅毒患者未进行规范治疗前,IgM抗体阳性率和RPR阳性率分别为74.88%、72.95%。各期梅毒患者中TP-IgM-WB及RPR阳性率分别为,一期梅毒86.79%、60.38%;二期梅毒74.11%、83.93%;三期梅毒25.00%、50.00%;隐性梅毒65.79%、60.53%。两种方法相比一期梅毒TP-IgM-WB敏感性比RPR高,差异有统计学意义(P<0.05)。符合规范治疗经随访至两年血清学治愈159例样本中,IgM抗体检测出4例阳性,其中一期梅毒中1例、二期梅毒1例、隐性梅毒2例,经FTA-abs-IgM验证后4例均为阳性。结论梅毒螺旋体IgM抗体在梅毒早期诊断中灵敏度高于RPR。在梅毒患者临床血清治愈判断中,除了RPR试验外,建议加入梅毒螺旋体IgM抗体作为检测指标。 展开更多
关键词 梅毒螺旋体 免疫印迹 免疫球蛋白M 治愈
黄瓜花叶病毒RNA3基因间隔区的功能研究 认领
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作者 杨磊 张建平 +1 位作者 孙鑫 卢全有 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期913-922,共10页
黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)是RNA病毒基因组功能研究的重要模式种,其各个开放阅读框及顺式作用元件的功能已较为清楚,但还缺乏RNA3基因间隔区的功能在植物体水平上的相关研究。本研究采用基因合成和双酶切的方法构建了基... 黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)是RNA病毒基因组功能研究的重要模式种,其各个开放阅读框及顺式作用元件的功能已较为清楚,但还缺乏RNA3基因间隔区的功能在植物体水平上的相关研究。本研究采用基因合成和双酶切的方法构建了基因间隔区(Intergenic region,IGR)3’UTR、5’UTR和全序列的缺失突变体侵染性克隆(简称pΔ3’UTR,pΔ5’UTR和pΔAll),并结合农杆菌介导的瞬时表达分析了IGR的功能。接种结果显示,注射pΔ3’UTR侵染性克隆的本氏烟表现出与注射野生型(Wild type,Wt)的本氏烟相似的症状,但要比Wt晚3.5d,而注射pΔ5’UTR、pΔAll的本氏烟没有表现任何症状,直至枯萎。Western Blot结果显示,注射突变体的本氏烟中,只有注射pΔ3’UTR的本氏烟在出现症状后可被检测到外壳蛋白(Coat protein,CP),但远低于Wt中的CP表达量,说明IGR 3’UTR缺失使最终翻译出来的外壳蛋白水平明显降低;Northern Blot结果显示,也只有注射pΔ3’UTR的本氏烟在出现症状后表达了RNA3和RNA4,但表达量始终低于野生型。针对接种叶内RNA3的半定量RT-PCR结果显示,注射Wt、pΔ3’UTR的本氏烟的预期条带亮度都很高,说明RNA3在缺失IGR 3’端序列时仍能正常转录且能正常复制;而注射pΔ5’UTR、pΔAll的本氏烟的预期条带亮度都很低,说明RNA3在缺失IGR 5’端序列或缺失IGR全部序列时,cDNA仍能转录出少量的RNA3,但这些RNA3完全丧失了复制能力。本研究揭示IGR5’UTR含有RNA3复制的必要元件,其缺失将使病毒完全失去复制能力;IGR 3’UTR控制着RNA3复制的效率,其缺失导致RNA3的积累量显著降低;IGR 3’UTR缺失时病毒只翻译出少量的CP,但也使寄主产生严重的症状。 展开更多
关键词 黄瓜花叶病毒(CMV) 基因间隔区(IGR) Northern Blot Western Blot
利用同源重组构建BMP6、BMPR1B真核表达载体及共转染成纤维细胞表达的研究 认领
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作者 荣恒 张梦瑶 +1 位作者 贺建宁 柳楠 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2020年第6期195-201,共7页
旨在构建敖汉细毛羊BMP6、BMPR1B基因的过表达载体,而后将其导入成纤维细胞,分析转染后两基因mRNA、蛋白表达量的变化及基因间相互作用对毛囊的影响。选择40日龄敖汉细毛羊胎羊,采集组织样品,提取RNA后反转录成cDNA,通过PCR反应后利用S... 旨在构建敖汉细毛羊BMP6、BMPR1B基因的过表达载体,而后将其导入成纤维细胞,分析转染后两基因mRNA、蛋白表达量的变化及基因间相互作用对毛囊的影响。选择40日龄敖汉细毛羊胎羊,采集组织样品,提取RNA后反转录成cDNA,通过PCR反应后利用SoSo试剂盒将纯化的目的片段与表达载体pcDNA3.1连接。酶切鉴定正确后,转至大肠杆菌DH5α感受态细胞,振荡培养并挑取单菌落扩大培养。提取质粒后将pcDNA3.1-BMP6、pcDNA3.1-BMPR1B单、共转染至成纤维细胞中。转染后测定表达量的变化并探究两基因间的作用关系。结果表明,共转染成纤维细胞后BMPR1B基因及BMPR1B蛋白的表达量均较单转染组极显著升高(P<0.01),而BMP6基因及BMP6蛋白的表达量与单转染组无显著差异(P>0.05)。因此,BMP6基因促进了BMPR1B基因的表达,BMPR1B基因对BMP6基因的表达几乎没影响。 展开更多
关键词 敖汉细毛羊 同源重组技术 成纤维细胞 RT-PCR Western Blot
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成纤维细胞生长因子受体FGFR1真核表达质粒的构建及其在HEK293T细胞的表达 认领
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作者 金锦花 李科岩 +2 位作者 张玲 王玉慧 邓晓明 《昆明医科大学学报》 CAS 2020年第2期16-20,共5页
目的建立一个有效表达FGFR1的真核系统。方法从人胎盘组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增得到FGFR1基因,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1上,构建成pcDNA3.1-FGFR1质粒表达载体,并在HEK293T细胞重组表达;将pcDNA3.1-FGFR1质粒转染HEK293T细... 目的建立一个有效表达FGFR1的真核系统。方法从人胎盘组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增得到FGFR1基因,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1上,构建成pcDNA3.1-FGFR1质粒表达载体,并在HEK293T细胞重组表达;将pcDNA3.1-FGFR1质粒转染HEK293T细胞,通过免疫印迹和免疫荧光检测FGFR1在细胞中的表达情况。结果扩增的FGFR1序列与数据库一致;通过构建表达载体和转染细胞实现了FGFR1 cDNA在HEK293T细胞膜上的表达。结论成功扩增出FGFR1 cDNA基因,经过转染HEK293T细胞,实现了FGFR1在HEK293T细胞的高效表达。 展开更多
关键词 FGFR1 HEK293T细胞 表达 WESTERN BLOT 免疫荧光
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